Desenmascaramiento del antígeno T por larvas de Trichinella spiralis y Ascaris lumbricoides / T antigen unmasking by Trichinella spiralis and Ascaris lumbricoides larvae / Desmascaramento do antigeno T por larvas de Trichinella spiralis e Ascaris lumbricoid

La activación T es causada por cambios en la estructura de la membrana de los glóbulos rojos (GR), que producen la aglutinación de esas células transformadas con la mayoría de los sueros de adultos ABO compatible. La unión del antígeno T con su anticuerpo específico desencadena poliaglutinación, hemólisis, trombocitopenia y trombosis. El objetivo del trabajo fue estudiar el efecto de larvas de A. lumbricoides y T. spiralis sobre el desenmascaramiento del antígeno T eritrocitario. Se trabajó con 3 concentrados de larvas L1/ L2 de A. lumbricoides (CLAL), y 6 de Larvas Musculares de T. spiralis (LM): CLAL1 y LM1: 450-500 larvas/mL; CLAL2 y LM2: 900-1000 larvas/mL; CLAL3 y LM3: 1800-2000 larvas/mL; LM4: 3000-3500 larvas/mL; LM5: 7500-8000 larvas/mL; LM6: 20.000 larvas/mL. Se utilizaron GR Grupo O en medio enzimático. Los GR se incubaron con igual volumen de CLAL/ LM y los GR Controles con solución fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Se realizaron Pruebas de Aglutinación en Placa y en Tubo, enfrentando GR Tratados y Controles a sueros de adulto y de cordón. Los resultados mostraron que 2 de las 5 suspensiones de GR Tratados con CLAL3 y 1 de las 5 Tratadas con LM6, aglutinaron con suero de adulto, pero no con suero de cordón. Los GR incubados con los concentrados restantes y los Controles no aglutinaron con ninguno de los sueros. Se concluye que es importante continuar estos estudios para relacionar la activación T con las dosis infectantes en ascariosis y triquinosis, particularmente en patologías que cursen con déficit de ácido siálico.

T activation is caused by changes in the structure of red blood cells (RBC) membrane producing the agglutination of these transformed cells with the majority of adult ABO compatible sera. The union of T antigen with its specific antibody unleashes polyagglutination, haemolysis, thrombocytopenia, and thrombosis. The aim of the present work was to study the effect of A. lumbricoides and T. spiralis larvae on erythrocyte T antigen unmasking. Work was performed on 3 L1/ L2 larvae concentrates of A. lumbricoides (ALLC) and 6 muscle larvae concentrates of T. spiralis (ML): ALLC1 and ML1: 450-500 larvae/ mL; ALLC2 and ML2: 900-1,000 larvae/ mL; ALLC3 and ML3: 1,800-2,000 larvae/ mL; ML4: 3,000-3,500 larvae/ mL; ML5: 7,500-8,000 larvae/ mL; ML6: 20,000 larvae/ mL. Group O RBC in enzymatic medium were used. RBC were incubated with an equal volume of ALLC/ ML and the Controls with physiological solution for 120 minutes at 37 ºC. Plate and Tube Agglutination Tests were made, facing Treated RBC and Controls against adult and cord human sera. The results showed that 2 of the 5 RBC suspensions treated with ALLC3 and 1 of the 5 RBC suspensions treated with LM6 agglutinated with serum from adult, but not cord serum. RBC incubated with the remaining concentrates and Control suspensions were not agglutinated with any of the sera. It can be concluded that it is important to continue these studies to correlate T activation with infective dose in ascariosis and trichinosis, particularly in pathologies that course with sialic acid deficiency.

Ativação T é causada por alterações da estrutura do membrana dos glóbulos vermelhos (GV), que produz a agregação dessas células transformadas com a maioria dos soros de adultos ABO compatível. A União de antígeno T com o anticorpo específico desencadeia poliaglutinação, hemólise, trombocitopenia e trombose. O objetivo do trabalho foi estudar o efeito de larvas da A. lumbricoides e T. spiralis sobre o desmascaramento do antígeno T eritrocitário. Trabalhou-se com 3 concentrados de larvas L1 / L2 da A. lumbricoides (CLAL) e 6 de larvas musculares da T. spiralis (LM): CLAL1 y LM1: 450-500 larvas/mL; CLAL2 LM2: 900-1000 larvas/mL; CLAL3 y LM3: 1800-2000 larvas/mL; LM4: 3000-3500 larvas/mL; LM5: 7500-8000 larvas/mL; LM6: 20.000 larvas/mL. Foram utilizados eritrócitos Grupo O em meio enzimático de bromelina O sedimento globular foi incubado com igual volume de CLAL / LM e o de GR Controles com solução fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Foram realizados Testes de Aglutinação em Placa e em Tubo, enfrentando os GV Tratados e Controles a soros humanos de adulto e de cordão. Se utilizaron GV Grupo O en medio enzimático. Os GV foram incubados com igual volume de CLAL/ LM e os GV Controles com solução fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Realizaram-se Provas de Aglutinação em Placa e em Tubo, enfrentando GV Tratados e Controles a soros de adulto e de cordão. Os resultados mostraram que 2 das 5 suspensões de GV Tratadas com CLAL3 e 1 das 5 Tratadas com LM6, aglutinaram com soro de adulto, mas não com soro de cordão. Os GV incubados com as concentrações restantes e os Controles não aglutinaram com nenhum dos soros. Conclui-se que é importante continuar estes estudos para relacionar a ativação T com as doses infectantes em ascaríase e triquinose, particularmente em patologias que cursem com déficit de ácido siálico. controles, não aglutinaram com nenhum dos soros.

Exposición del antígeno T eritrocitario por acción de Ascaris lumbricoides / Exposure of erythrocyte T antigen by Ascaris lumbricoides action / Exposição do antígeno T eritrocitário por ação de Ascaris lumbricoides

La poliaglutinabilidad de los glóbulos rojos puede deberse al desenmascaramiento del antígeno T críptico debido a la acción de neuraminidasas microbianas que eliminan residuos terminales de ácido siálico en la membrana del hematíe. En experiencias preliminares se demostró que Ascaris lumbricoides capta ácido siálico del eritrocito y que las suspensiones globulares en medio enzimático, incubadas con este parásito, pierden totalmente la capacidad de agregación. El objetivo fue estudiar la exposición del antígeno T eritrocitario, por acción de A. lumbricoides sobre la carga aniónica de glóbulos rojos deficientes en ácido siálico. Se trabajó con 48 extractos de ejemplares adultos del parásito ([EA]) y un concentrado de larvas L1/ L2 ([CLAL]):1300-1500 larvas/mL). Se utilizaron eritrocitos Grupo O en medio enzimático de bromelina (GRB) y eritrocitos Control en medio salino (GRC). El sedimento globular de GRB se incubó con igual volumen de [EA]/ [CLAL] y el de GRC con solución fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Se realizaron Pruebas de Aglutinación en Placa y en Tubo, enfrentando los GRB y GRC a sueros humanos de adulto y de cordón. Los resultados mostraron que el 33,33% de los GRB incubados con [EA] y el 66,67% de los GRB incubados con [CLAL] aglutinaron con suero de adulto, pero no con suero de cordón. Los GRC no aglutinaron con ninguno de los sueros. Es la primera vez que se comunica la exposición del antígeno T eritrocitario por acción de un parásito. La activación T podría producir autoaglutinación y hemólisis en el hombre adulto y representaría un factor de riesgo transfusional en la población infantil.

Red cell polyagglutination may be due to the unmasking of the cryptic T antigen by the action of microbial neuraminidases, which remove terminal sialic acid residues in the erythrocyte membrane. Previous experiences showed that Ascaris lumbricoides capture erythrocyte sialic acid and thatglobular suspensions in enzymatic medium, incubated with this parasite, completely lost the ability to aggregate. The aim of this work was to study the erythrocyte T antigen exposure by A. lumbricoides action on the anionic charge of sialic acid deficient red cells. Studies were done on 48 adult specimen parasite extracts ([AE]) and an L1/ L2 larvae concentrate ([ALLC]: 1300-1500 larvae/mL). Group O red cells in bromelain enzymatic medium (RCB) and Control erythrocytes in saline medium (RCC) were used. The RCB sediment was incubated with an equal volume of [AE]/ [ALLC] and the RCC sediment with physiological solution during 120 minutes at 37 ºC. Plate and Tube Agglutination Tests were performed, contrasting RCB and RCC with adult and cord human sera. The results showed that 33.33% of the RCB incubated with [AE] and 66.67% of the RCB incubated with [LCAL] agglutinated with serum from adult, but not cord serum. RCB were not agglutinated with any of the sera. It is the first time that erythrocyte T antigen exposure by a parasite action is communicated. T activation could produce autoagglutination and haemolysis in the adult and would represent a transfusion risk factor in the child population.

A poliaglutinabilidade dos glóbulos vermelhos pode ser resultado do desmascaramento do antígeno críptico T devido à ação de neuraminidases microbianas que eliminam resíduos terminais de ácido siálico na membrana da hemácia. Em experiências preliminares foi demonstrado que Ascaris lumbricoides capta ácido siálico do eritrócito e que as suspensões globulares em meio enzimático, incubadas com esta parasita, perdem totalmente a capacidade de agregação. O objetivo foi estudar a exposição do antígeno T eritrocitário, por ação de A. lumbricoides sobre a carga aniônica de glóbulos vermelhos deficientes em ácido siálico. Trabalhou-se com 48 extratos de exemplares adultos da parasita ([EA]) e um concentrado de larvas L1/ L2 ([CLAL]):1300-1500 larvas/mL). Foram utilizados eritrócitos Grupo O em meio enzimático de bromelina (GVB) e eritrócitos Controle em meio salino (GVC). O sedimento globular de GVB foi incubado com igual volume de [EA]/ [CLAL] e o de GVC com solução fisiológica durante 120 minutos a 37 ºC. Foram realizados Testes de Aglutinação em Placa e em Tubo, enfrentando os GVB e GVC a soros humanos de adulto e de cordão. Os resultados mostraram que 33,33% dos GVB incubados com [EA] e 66,67% dos GVB incubados com [CLAL] aglutinaram com soro de adulto, mas não com soro de cordão. Os GVC não aglutinaram com nenhum dos soros. É a primeira vez que se comunica a exposição do antígeno T eritrocitário por ação de uma parasita. A ativação T poderia produzir autoaglutinação e hemólise no homem adulto e representaria um fator de risco transfusional na população infantil.

Acción de Ascaris lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados / Ascaris lumbricoides action on the erythrocyte and desyalated erythrocyte anionic charge / Ação de Ascaris lumbricoides sobre a carga aniônica de eritrócitos e eritrócitos desializados

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de A. lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados. Se trabajó con 30 extractos ([EA]) y 2 concentrados larvales parasitarios ([CLAL] 1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) y eritrocitos Grupo "O" en medio salino (GR) y enzimático (GRb). Se incubó el sedimento globular con igual volumen de parásito y el Control (GRc) con solución fisiológica, a 37 ºC. Se aplicaron los Métodos de Polibrene y Azul Alcian y se implementó una Titulación de la Agregación a partir del Polibrene. Se definieron coeficientes para cada método que fueron analizados estadísticamente. Los resultados mostraron que a mayor tiempo de tratamiento y a mayor concentración larvaria, aumentó la captación de ácido siálico (AS) disminuyendo la agregación de GR y GRb. El efecto fue mayor en la incubación del parásito con GRb en relación de GR. El tratamiento enzimático redujo la carga porcentual en los glóbulos incubados con ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% de la inicial) y la Diferencia de Carga de GR y GRb debida a ambos fue aproximadamente del 10% indicando que la pérdida de carga producida por [CLAL]1 fue significativa con respecto a [CLAL]2. Se concluye que A. lumbricoides puede captar AS eritrocitario. Este fenómeno contribuiría a explicar la anemia y trombos producidos en ascariosis, destacando que en pacientes con patologías que cursen con déficit de AS estas complicaciones serían más relevantes.

The aim of this work was to study the A. lumbricoides' effect on the anionic charge of erythrocytes and desyalated erythrocytes. Work was carried out on 30 extracts ([AE]) and 2 larval concentrates ([ALLC] 1: 500-600; ([ALLC] 2: 200-300 larvae/ mL) of the parasite and Group O erythrocytes in saline (RC) and enzymatic medium (RCb). The red cell sediment was incubated with an equal volume of parasite and the Control (RCc) with saline solution, at 37C. Polybrene and Alcian Blue Methods were applied and Aggregation Titulation from Polybrene was implemented. The coefficients for each method were defined,which were analyzed statistically. The results showed that a longer treatment and also at higher larval concentration,increased the capture of sialic acid (AS),while decreasing the RC and RCb aggregation. The effect was greater on the incubation of the parasite with RCb in relation to RC. The enzymatic treatment reduced similarly the percentage charge in the globules incubated with both [ALLC] (16% -17% of initial) and the variation of RC and RCb charge due to both was about 10%,indicating that the charge loss caused by [ALLC]1 was significant with regard to [ALLC]2. We concluded that A. lumbricoides can capture erythroctyte SA. This phenomenon would contribute to explain the anaemia and thrombi produced in ascariosis,noting that in patients with AS deficit pathologies,these complications would be more relevant.

O objetivo foi estudar o efeito de A. lumbricoides sobre a carga aniônica de eritrócitos e eritrócitos desializados. Trabalhou-se com 30 extratos ([EA]) e 2 concentrados larvais parasitários ([CLAL]1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) e eritrócitos Grupo "O" em meio salino (GV) e enzimático (GVb). Foi incubado o sedimento globular com igual volume de parasita e o Testemunha (GVc) com solução fisiológica,a 37ºC. Foram aplicados os Métodos de Polybrene e Azul Alciano e se implementou uma Titulação da Agregação a partir do Polybrene. Definiram-se coeficientes para cada método que foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram que a maior tempo de tratamento e a maior concentração larvária,aumentou a captação de ácido siálico (AS) diminuindo a agregação de GV e GVb. O efeito foi maior na incubação da parasita com GVb em relação de GV. O tratamento enzimático reduziu a carga percentual nos glóbulos incubados com ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% da inicial) e a Diferença de Carga de GV e GVb devida a ambos foi aproximadamente de 10% indicando que a perda de carga produzida por [CLAL]1 foi significativa com relação a [CLAL]2. A conclusão é que A. lumbricoides pode captar AS eritrocitário. Este fenômeno contribuiria a explicar a anemia e trombos produzidos em ascaridíase,destacando que em pacientes com patologias que cursem com déficit de AS estas complicações seriam mais relevantes.

Alteración de la carga eritrocitaria utilizando el método de azul Alcian en extractos de Ascaris lumbricoides / Change of erythrocyte charge with the use of Alcian blue method in Ascaris lumbricoides extracts

Introducción: el estudio de las interacciones hospedador-parásito es un nuevo desafío para comprender aspectos del metabolismo parasitario, los mecanismos de invasión, escape inmunológico y daño. Ascaris lumbricoides puede provocar anemia y trombosis. Previamente se demostró que este parásito altera la carga superficial eritrocitaria, lo cual indica que puede captar ácido siálico del glóbulo rojo. Objetivo: estudiar el efecto producido por extractos del parásito adulto sobre la carga eritrocitaria, utilizando el método de azul Alcian y comparar su sensibilidad con el método de Polibrene. Métodos: se trabajó con 55 extractos parasitarios [EA] y con suspensiones de eritrocitos grupo O. Se realizó el tratamiento de los glóbulos incubando el sedimento con igual volumen de [EA] a 37 ºC durante 1 h. El Control (eritrocitos sin contacto con [EA]) fue incubado con tampón fosfato pH 7,4. Se aplicó el método de azul Alcian y se determinó la carga aniónica eritrocitaria porcentual (CAE por ciento) en el Control y en los glóbulos tratados. Se definió el coeficiente experimental de carga aniónica eritrocitaria (Cexp CAE), como el cociente entre CAE por ciento final e inicial. Resultados: se observó que 27 de los 55 [EA] (49,1 por ciento) modificaron la carga de los glóbulos rojos, el Cexp CAE para estos eritrocitos resultó 0,75 ± 0,1144 y para los que no mostraron variación de carga de 0,94 ± 0,04450. El análisis estadístico concluyó que los métodos de Polibrene y de azul Alcian tienen sensibilidades comparables (p> 0,20). Conclusiones: Ascaris lumbricoides es capaz de captar ácido siálico del eritrocito, lo que contribuiría a explicar la trombosis atribuida al parásito, pero también sugeriría que el nematodo lo podría utilizar en sus rutas metabólicas o en sus estrategias de evasión inmunológica.

Introduction: the study of the host-parasite interactions is a new challenge to understanding some aspects of the parasitic metabolism and the mechanisms of invasion, immunological evasion and damage. Ascaris lumbricoides may cause anemia and thrombosis. It was previously shown that Ascaris lumbricoides modified the superficial charge of erythrocytes, which means that the parasite can capture sialic acid from the red blood cell. Objective: to study the effect of adult parasite extracts on the erythrocyte charge using the Alcian Blue method and to compare its sensitivity with the Polybrene method. Methods: fifty five adult parasite extracts and Group O erythrocyte suspensions were used. The erythrocytes were treated by incubating the sediment with an equal volume of parasite extracts for one hour at 37 ºC. The control group (erythrocytes without any contact with the parasite extracts) was incubated with pH 7.4phosphate buffer solution. Alcian Blue method was applied and the percentage erythrocyte anionic charge was determined in the control group and in the treated red cells. The experimental coefficient of erythrocyte anionic charge was defined as the quotient between the initial and the final percentage erythrocyte anionic charge. Results: it was shown that 27 out of 55 parasite extracts (49.1 percent) modified the charge of the red blood cells, being their experimental coefficient of the erythrocyte anionic charge 0.75 ± 0.1144 whereas the same coefficient amounted to 0,94 ± 0.0445 for those which did not show any charge variation. The statistical analysis concluded that the Polybrene and Alcian Blue Methods had comparable sensitivities (p>0.20). Conclusions: A. lumbricoides is able to capture sialic acid from the erythrocyte, which would not only explain the thrombosis attributed to the parasite, but also suggest that the nematode could use this acid either in its metabolic routes or for its strategies of immunological evasion.

Captación de ácido siálico por larvas de Ascaris lumbricoides durante incubación in vivo / Sialic acid capture by Ascaris lumbricoides larvae during in vivo incubation / Captação de ácido siálico por vermes de Ascaris lumbricoides durante incubação in vivo

La agregación eritrocitaria afecta la microcirculación y su estudio es importante en las vasculopatías. Se comunicó que Ascaris lumbricoides puede capturar ácido siálico (AS) del eritrocito y alterar la carga aniónica del glóbulo. El objetivo de este trabajo fue estudiar la captación de AS por larvas de A. lumbricoides incubadas in vivo con eritrocitos. Se trabajó con un concentrado de larvas ([CLAL]) incubado en 4 tubos con buffer fosfato y antibióticos. En dos se agregaron eritrocitos Grupo O. Los restantes fueron controles. Se incubaron a 37 °C (5% CO2) durante 24 y 48 horas. Las larvas fueron separadas, recolectadas, concentradas y contadas microscópicamente (larvas/mL: [CLAL]1: 1500-1700; [CLAL]3 1600-1800; [CLAL]2 y 4: 200400). Se utilizaron las técnicas de Inhibición de la Agregación por Polibrene (IAP) y Alcian Blue (AB). La IAP mostró una diferencia significativa entre los Títulos de Polibrene diluido en solución fisiológica y en [CLAL]1 y 2 que fueron incubados con eritrocitos 24 y 48 horas respectivamente. No hubo variación en el Título de los Controles correspondientes ([CLAL]3 y [CLAL]4). AB realizada en [CLAL]1 y [CLAL]3, determinó CASCap%= 6,65% ± 0,36 y CAS[CLAL]3% = 0,67% ± 0,36. La experiencia demostró la captación de AS por las larvas incubadas in vivo con eritrocitos y sugirió que ellas no presentan AS intrínseco. El secuestro de AS durante la migración larvaria podría ser importante en la interacción parásito-hospedador.

Erythrocyte aggregation affects microcirculation and its study is important in vascular diseases. It was communicated that Ascaris lumbricoides can capture erythrocyte sialic acid (SA) and alter the anionic charge on the red cell. The aim of this work was to study SA capture by A. lumbricoides larvae incubated in vivo with erythrocytes. Work was performed with concentrated larvae ([ALLC]) incubated in 4 tubes with phosphate buffer and antibiotics. Group O erythrocytes were added in two Tubes. The remaining were Controls. They were incubated at 37 °C (5% CO2) for 24 and 28 hours. The larvae were separated, collected, concentrated and counted microscopically (larvae/mL: [ALLC]1:1500-1700; [ALLC]3: 1600-1800; [ALLC]2 and 4: 200- 400). Aggregation Inhibition by Polybrene (AIP) and Blue Alcian (BA) techniques were used. AIP showed a significant difference between Polybrene Titers diluted with physiological solution and with [ALLC]1 and 2, which were incubated with erythrocytes 24 and 48 hours respectively. There was no change in the Title of the corresponding Controls. BA performed in [ALLC]1 and [ALLC]3 determined CapSAC = 6.65% ± 0.36 and SAC[CLAL]3 %= 0.67% ± 0.36. The experience showed SA capture by larvae incubated in vivo with erythrocytes and it suggested that they have no intrinsic SA. SA kidnapping during the larval migration could be important in parasite-host interaction.

A agregação eritrocitária afeta a microcirculação e seu estudo é Importante nas vasculopatias. Foi comunicado que o Ascaris lumbricoides pode capturar ácido siálico (AS) do eritrocito e alterar a carga aniônica do glóbulo. O objetivo deste trabalho foi estudar a captação de AS por vermes de A. lumbricoides incubados in vivo com eritrocitos. Trabalhouse com uma concentração de larvas ([CLAL]) incubada em 4 tubos com buffer fosfato e antibióticos. Em dois foram agregados eritrocitos Grupo O. Os restantes foram controles. Foram incubados a 37 °C (5% CO2) durante 24 e 48 horas. As larvas foram separadas, coletadas, concentradas e contadas microscopicamente (larvas/mL: [CLAL]1: 1500-1700; [CLAL]3 1600-1800; [CLAL]2 e 4: 200-400). As técnicas utilizadas foram de Inibição da Agregação por Polybrene (IAP) e Alcian Blue (AB). A IAP mostrou uma diferenga significativa entre os Títulos de Polybrene diluido em solução fisiológica e em [CLAL]1 e 2 que foram incubados com eritrocitos 24 e 48 horas respectivamente. Näo houve variação no Título dos Controles correspondentes ([CLAL]3 e [CLAL]4). AB realizada em [CLAL]1 e [CLAL]3, determinou CASCap%= 6,65% ± 0,36 e CAS[CLAL]3% = 0,67% ± 0,36. A experiencia demons-trou a captação de AS pelos vermes incubados in vivo com eritrócitos e sugeriu que eles näo apresentam AS intrínseco. O sequestro de AS durante a migração de larvas poderia ser importante na interação parasita-hospedeiro.

Alteración de la carga aniónica superficial de glóbulos rojos y glóbulos rojos desializados por Ascaris lumbricoides / Alteration in superficial anionic charge of erythrocytes and desialated erythrocytes caused by Ascaris lumbricoides

INTRODUCCIÓN: eL ácido siálico del eritrocito tiene importancia hemorreológica y hemodinámica. Su disminución promueve la agregación eritrocitaria y la reducción del flujo sanguíneo. OBJETIVO: estudiar el efecto producido por A. lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados, en función del tiempo de contacto de los glóbulos rojos con extractos del parásito. MÉTODOS: se trabajó con 20 extractos parasitarios ([EA]) y con suspensiones de eritrocitos Grupo O en medio salino (GR) y en medio enzimático de bromelina (GR B). Se realizó el tratamiento de los glóbulos incubando el sedimento globular con igual volumen de extractos parasitarios a 37 ºC durante 15, 30, 45, 60, 90 y 120 min. Para cada tiempo de tratamiento hubo un control (eritrocitos sin contacto con extractos parasitarios). Se aplicó simultáneamente el método de Polibrene en el control, GR y GR B. Se asignó una puntuación a cada agregación obtenida. Se calculó CexpCAS[EA] como el cociente entre la puntuación del control y de los eritrocitos tratados. RESULTADOS: los análisis estadísticos permitieron concluir que el tiempo de tratamiento de GR y GR B tuvo un efecto altamente significativo sobre el valor del CexpCAS[EA]; la mediana de CexpCAS[EA] fue significativamente mayor para GR respecto de GR B; la captación de ácido siálico en GR fue mayor a partir de los 90 min, mientras que en GR B fue menor a los 15 min, sin diferencias significativas entre los demás tiempos de tratamiento. Los resultados mostraron que la captación de ácido siálico por el parásito dependió del tiempo de tratamiento y que el extracto parasitario provocó mayor alteración en la carga superficial de GR B. CONCLUSIONES: la disminución de ácido siálico podría relacionarse con la trombosis y la anemia comunicadas en ascariosis. La experiencia permite suponer que el efecto del parásito puede tener mayor relevancia en individuos con diabetes e hipertensión.

INTRODUCTION: sialic acid of the erythrocytes has hemorreologic and hemodynamic importance, so its reduction causes erythrocyte aggregation and low blood flow. OBJECTIVE: to study the effect of A. lumbricoides on the anionic charge of erythrocytes and of desialated erythrocytes, taking the time of contact of the erythrocytes with parasite extracts into account. METHODS: twenty parasite extracts and Group O erythrocyte suspensions in saline medium (GR) and in bromelin enzymatic medium (GRb) were used. The erythrocytes were treated by incubating the globular sediment with the same volume of parasite extracts, at 37 ºC for 15, 30, 45, 60 , 90 and 120 min. There was a control for each treatment interval (erythrocytes without contact with parasite extracts). The polybrene´s method was simultaneously applied to the controls, the GR ad the GRb. Each obtained aggregation was given a scoring. CexpCAS[EA] was calculated as the quotient between the treated erythrocytes scoring and the control scoring. RESULTS: the statistical analysis allowed arriving to the conclusion that the time of GR and GR B treatment had a highly significant effect on the value of CexpCAS[EA]; the median of CexpCAS[EA]; was significantly higher for GR than for GR B; the sialic acid uptake in GR was higher from 90 minutes on, whereas this parameter was lower in GR B at 15 min; no significant differences were observed for the rest of the treatment times. The results showed that the sialic acid uptake by the parasite depended on the time of treatment and that the parasite extract caused more alteration in the superficial charge of GR B. CONCLUSIONS: the reduction of sialic acid could be related to thrombosis and anemia in ascariosis. The experience gained allows us to consider that the effect of the parasite may be more significant in diabetic and hypertensive individuals.

Absorción de antígenos solubles ABH por larvas de Ascaris lumbricoides in vitro / Absortion of ABH soluble antigens by Ascaris lumbricoides larvae in vitro

En investigaciones previas se identificaron antígenos ABH en ejemplares adultos de Ascaris lumbricoides. Los parásitos sólo presentaron epitopes expresados en sus respectivos hospedadores, adquiridos por absorción. Como el parásito adulto vive en el intestino delgado, podría presentarlos debido a que la larva de cuarto estadio conserva los epitopes absorbidos en la migración y los mantiene durante el proceso madurativo a adulto o bien el ejemplar adulto los adquiriría de las secreciones intestinales. El objetivo fue estudiar la absorción de epitopes solubles ABH por larvas mantenidas en cultivo. Las larvas fueron obtenidas de la eclosión de huevos y se recolectaron y cultivaron en medio RPMI. Se adicionó antígeno soluble B en tres tubos que fueron incubados 2, 3 y 6 días y antígeno soluble A en dos tubos cultivados 6 días. Cada tiempo de cultivo tuvo su control negativo de absorción, donde se investigaron productos de excreción-secreción (ES) Tipo antígenos ABH. La técnica de Inhibición de la Aglutinación Semicuantitativa demostró epitopes B en las larvas cultivadas 3 días y en las incubadas 6 días epitopes A y B. Solamente se evidenciaron productos ES símil A y B en el Control de 6 días. Se concluye que A. lumbricoides puede absorber determinantes ABH a partir de antígenos solubles.

Previous experiences have identified ABH antigens in A. lumbricoides's adult specimens. The parasites only showed epithopes expressed in their respective hosts. It was demonstrated that epithopes are acquired by absorption by means of the culture of larvae with erythrocytes. As the adult parasite lives in the small intestine, it could be present there because the fourth stage larva retains the epithopes absorbed in the migration and keeps them during the maturation process to adult, or the adult specimen would acquire them from intestinal secretions. Larvae were obtained by hatching of eggs and they were collected and cultured in RPMI medium. The aim of this work was to study the ABH soluble epithopes by larvae in culture. B soluble antigen was added into three tubes, which were incubated for 2, 3 and 6 days, and A soluble antigen was poured into two tubes, both cultured for 6 days. Each culture time had its absorption Negative Control where ABH like antigen excretion/secretion products (ES) were investigated. The Semiquantitative Inhibition Agglutination Test showed B epithopes in the larvae cultured for 3 days and A and B epithopes in the larvae incubated for 6 days. Similar A and B ES products were only evidenced in the Control of 6 days. The results conclude that A. lumbricoides may absorb ABH antigenic determiners from soluble antigens.

Efecto producido por Ascaris lumbricoides sobre la carga superficial eritrocitaria utilizando el Método de Polibrene / Effect of Ascaris lumbricoides on the erythrocyte superficial charge using Polybrene Method

Los ácidos siálicos (AS) contenidos en glucoproteínas y glucolípidos participan en diversas funciones biológicas y su presencia en el eritrocito tiene importancia hemorreológica y hemodinámica. Se considera que los AS intervendrían en la interacción parásito-hospedador. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto producido por A. lumbricoides sobre la carga superficial eritrocitaria utilizando el Método de Polibrene. Se trabajó con 51 extractos de parásito adulto ([EA]) y con 4 concentrados larvales ([CLAL]: 2000/ 1000/ 500/ 250 larvas/ mL). El método fue aplicado en eritrocitos no tratados (Control) y tratados con [EA]/ los 4 [CLAL] de forma simultánea. El tratamiento con las larvas se realizó en 18 experiencias. Los eritrocitos tratados con el 37, 25% de los [EA] presentaron menor agregación en relación al Control. Los análisis estadísticos mostraron que este efecto no se relacionó con la concentración proteica del [EA]. La disminución de agregado en el tratamiento con [CLAL] fue dependiente de la concentración larvaria y se relacionó a concentraciones = a 500 larvas/ mL. Se observó que la fijación [EA]/ [CLAL] al eritrocito no era fuerte. Los resultados demostraron que A. lumbricoides secuestra AS eritrocitario. Esta captación podría influir en la patología y / o participar en la evasión de la respuesta inmune del hospedador.

Sialic acids (SA) contained in glycoproteins and glycolipids participate in various biological functions; besides, its presence on the erythrocyte surface has both hemodynamical and hemorheological importance. SA are thought to intervene in the parasite-host interaction. The aim of this work was to study the effect of Ascaris lumbricoides on the erythrocyte superficial charge by using Polybrene Method. Work was carried out on 51 adult parasite extracts ([AE]) and 4 (larvae) larvae concentrates ([ALLC]: 2000 / 1000 / 500 / 250 larvae/ mL). The method was applied to non-treated (Control) and treated red cells with [AE] / all 4 [ALLC] simultaneously. Larvae´ treatment was conducted over 18 experiences. Erythrocytes treated with 37. 25% of the [AE] had lower aggregation than the Control. The statistical analysis showed that this effect was not related to the protein concentration of [AE]. The aggregate decrease in the treatment with [ALLC] was dependent on larvae concentration and it was related to larvae concentrations = 500 larvae/ mL. It was observed that the [AE]/ [ALLC] fixation to the erythrocyte was not strong. The results have shown that A. lumbricoides sequestrates SA erythrocyte. This capture could affect the pathology and/or participate in the escape of the host's immune response.

Alelos HLA-DRB1 en pacientes infectados con patógenos intracelulares en Rosario, Santa Fe / HLA-DRB1 alleles in patients infected with intracellular pathogens in Rosario, Santa Fe

En el desarrollo de la respuesta inmune a patógenos intracelulares participa el elevado polimorfismo de las moléculas HLA de clase II. El objetivo de este trabajo fue establecer la participación de los alelos HLA-DRB1 en personas con infección con Trypanosoma cruzi (T. cruzi) o con Mycobacterium leprae (M. leprae). Se estudiaron 252 individuos de la ciudad de Rosario, divididos en: 86 personas seropositivas para T cruzi (sin compromiso cardiológico de relevancia), 85 pacientes con diagnóstico de Lepra y 81 individuos controles, sin evidencia de patologías. El ADN genómico fue extraído de sangre periférica utilizando el método de salting out y empleado como templado para amplificar por PCR el segundo exón polimórfico de HLA-DRB1. Los alelos fueron tipificados mediante la técnica de PCR­-SSOP. La comparación de frecuencias mostró prevalencia de los alelos DRB1 *0409 y DRB1 *1503 en los individuos seropositivos para T. cruzi con respecto al grupo control. Por otra parte, el análisis estadístico indicó una disminución significativa del alelo DRB1 *1103 en pacientes con esta tripanosomiasis. Al examinar las frecuencias observamos en el grupo de pacientes con Lepra un aumento significativo de los alelos DRB1 *1401 y DRB1 *1406. Además observamos que las proporciones de los alelos DRB1 *0808 y DRB1 *1103 en los enfermos son significativamente inferiores con respecto al grupo control. Los alelos HLA DRB1 podrían actuar solos o en combinación con otros genes para conferir susceptibilidad o resistencia a estas infecciones en la población de Rosario, Argentina.

In the development of the immune response to intracellular pathogens implicated the high polymorphism of HLA class II molecules. The aim of this study was to establish the involvement of the HLA-DRB1 alleles in infected subjects with T. cruzi or leprosy patients in Rosario, Argentina. We studied 252 individuals who divided into: 86 positive people for T. cruzi without cardiac damage, 85 patients diagnosed with leprosy and controls 81 individuals without evidence of disease. Genomic DNA was extracted from peripheral blood using the standard salting out method and used as a template to amplify by the PCR the polymorphic second exon of the HLA­-DRB1. PCR products were hybridized separately with sequence-specifics oligonucleotides (SSOP). Statistical analysis indicated that of increased frequencies of DRB1 *0409, and DRB1 *1503 in individuals with Chagas' disease. DRB1 *1103 allele was prevalence in the group control and could be associated with resistance to the presence of trypanosomiasis. DRB1 *1401 and DRB1 *1406 alleles were significantly more prevalent in leprosy patients, whereas a decreased frequency of DRB1 *0808 and DRB1 *1103 alleles was found, by comparison with the group control. The HLA-DRB1 alleles could act alone or in combination with other genes to confer differential susceptibility and also protection to these diseases in Rosario, Argentina.

Estudio de las variantes alélicas del gen FUT2 en una población de Rosario, Santa Fe / Allele of FUT2 gen variables in a population of Rosario, Argentina

El estado secretor de un individuo está determinado por el gen Secretor (FUT2), responsable de la presencia de antígenos ABH en las secreciones del organismo. El polimorfismo del gen FUT2 muestra una gran variabilidad dependiente del tipo de población. Alrededor del 20% de los individuos caucásicos son no­secretores y presentan la mutación G428A. El objetivo de este trabajo fue estudiar las variables alélicas del gen FUT2 en una población de Rosario. Se trabajó con muestras de sangre periférica de dadores voluntarios (n=1728). Se determinó el estado secretor en plasma y saliva y el fenotipo Lewis. El ADN genómico fue extraído por la técnica de salting-out modificada y fue analizado por ASA-PCR con cebadores específicos para el alelo G428A y para el alelo wild type del gen FUT2. Los resultados obtenidos mostraron que el 77% de los individuos investigados fueron secretores y presentaron el fenotipo Lewis Le(a-b+). El polimorfismo G428A estuvo presente en homocigosis en un 7.5%, valor menor al reportado en la bibliografía para la población caucásica. El análisis molecular del gen FUT2 confirmaría la diversidad genética de la población investigada y podría ser utilizada como un marcador poblacional.

The secretor status is determinate by the secretor gene (FUT2) responsible of the ABH antigens expression in human secretions. About 20% of Caucasian individuals are non-secretors. The aim of this study was to study the allelic varieties of the FUT2 gene by a PCR reaction. We worked with peripheral blood samples of volunteers (n= 1728). We determinated the secretor status in plasma and saliva. The genomic DNA was extracted by an enzymatic digestion method and was analyzed by ASA-PCR with specific primers for the G428A allele and for the wild type allele of the FUT2 gene. The results obtained by serologic and molecular methods showed that the 77% of the investigate individuals were secretors. The G428A polymorphism had present in a 7.5%. The allelic varieties of the other non-secretor individuals different to the G428A might to correspond to other mutations. The molecular analysis of the FUT2 gene confirms the genetic diversity of the investigated population.

Separación de poblaciones de glóbulos rojos senescentes por gradientes preformados de Percoll / Separation of populations of senescent red blood cells by Percoll performed gradients

Los mecanismos que determinan la senescencia de los eritrocitos han sido extensamente estudiados, sin embargo, no se han logrado conclusiones definitivas debido a la ausencia de una técnica que permita el aislamiento de grupos etáreos bien definidos. Los métodos más comúnmente empleados se basan en el aumento de densidad de los eritrocitos durante el envejecimiento. En este trabajo desarrollamos una técnica para la separación de glóbulos rojos de distintas edades empleando gradientes preformados de Percoll, un polímero sintético con propiedades fisicoquímicas adecuadas para trabajar con células vivas. En las suspensiones eritrocitarias obtenidas se realizaron determinaciones hematológicas, actividades de enzimas antioxidantes y el ensayo de eritrofagocitosis. Los valores de los parámetros hematológicos evaluados fueron significativamente mayores en las suspensiones de glóbulos rojos jóvenes. Las actividades enzimáticas mostraron una disminución de la capacidad antioxidante en las poblaciones de eritrocitos senescentes. Este proceso favorecería la interacción de los hematíes envejecidos con las células fagocíticas, demostrada median­te el ensayo de eritrofagocitosis. Los resultados obtenidos indican que el método de gradientes de Percoll permite una adecuada separación de las suspensiones eritrocitarias de distintas edades, con una eficiencia comparable a la observada en la técnica de centrifugación diferencial considerada de referencia.

The mechanisms that determine the senescence of the erythrocytes have been extensively studied; however. definitive conclusions have not been achieved mainly because of the lack of a technique that allows the isolation of well-defined etarian groups. The methods most commonly used for separating erythrocytes from different ages are based on the increase in density that these cells present during their aging. In the present work we have developed a technique for obtaining red blood cells from different ages using Percoll preformed gradients, a synthetic polymer with adequate physic-chemic properties to work with lives cells. In the erythrocytes suspensions we have made hematological determinations. activities of antioxidants enzymes and the essay of erythrophagocytosis. The values of the hematological parameters were significantly higher in the suspensions of young red blood cells. In the measurements of the enzymatic activity we observed a decrease of the antioxidant capacity in the populations of senescent erythrocytes. This process would promote the interaction between the old erythrocytes and the phagocyte cells, demonstrated by the erythrophagocytosis essay. The results obtained indicate that the method Percoll density gradients allows an appropriate separation of the erythrocytes suspensions of different ages with a comparable efficiency to that observed in the technique differential centrifugation, considered as reference.

Pérdida de la expresión antigénica ABH en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas / Loss of ABH antigenic expression in patients with precancerous and cancerous oral lesions

Los antígenos ABH, productos de la interacción de 2 sistemas genéticos, Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos, sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la expresión de antígenos ABH en pacientes con lesiones orales premalignas y malignas orales. Se trabajó con muestras incluidas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales (n= 57). Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos: a) lesiones premalignas y malignas diagnosticadas clínica y anatopatológicamente y b) lesiones benignas (n=93). Se investigaron los antígenos ABH por la técnica de inmunoadherencia específica modificada. Se utilizó la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo. Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a negativa. Se observó una significativa relación entre la expresión antigénica ABH y el grado de malignidad de las lesiones analizadas (P Yates= 0,005). La pérdida de reactividad ABH en los sitios de mayor invasividad tumoral se correlaciona con el grado del desarrollo del tumor, el grado histológico y su malignidad.

The ABH antigens, which are produced by the interaction of 2 genetic systems, Hh and ABO, are subjected to laws of heredity and may be located not only in the erythrocytes, but also in most of the human cells. The objective of this paper was to investigate the expression of ABH antigens in patients with premalignant and malignant oral lesions. Work was done with samples included in paraffin plugs in patients with oral lesions (n= 57). The patients were classified into 2 groups: a) clinical and anatomopathologically diagnosed premalignant and malignant lesions, and b) benign lesions (n=93). The ABH antigens were investigated by the modified specific immunoadherence technique. Adherence to the vascular tissue was used as a positive control, whereas adherence to the fat tissue was considered as a negative control. The results were semiquantified from strongly positive to negative adherence. A significant relation between the ABH antigen expression and the degree of malignancy of the analyzed lesions (P Yates= 0.005) was observed. The loss of ABH reactivity in the sites of greater tumoral invasiveness is correlated with the tumor development degree, the histological degree and its malignancy.

Expresión antigénica ABH y carácter secretor en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas / Secretor status and ABH antigens expression in patients with oral lesion

Los antígenos ABH, productos de la interacción de dos sistemas genéticos Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la relación entre el carácter secretor de pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas y la expresión antigénica ABH en cortes histológicos de dichas lesiones. Se trabajó con muestras incluídas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales. Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos a) lesiones pre-malignas y malignas y b) lesiones benignas. Se investigaron los antígenos ABH por la técnica de inmunoadherencia específica modificada. Se utilizó la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo. Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a negativa. El carácter secretor fue determinado por la técnica de inhibición de la hemaglutinación. En 21 de las 34 muestras se observó una débil expresión antigénica en áreas atípicas, y deleción total en las áreas histológicamente afectadas por neoplasia. En 8 muestras hubo pérdida total de los antígenos ABH tanto en áreas normales como patológicas, estos pacientes presentaron un mayor grado de malignidad y metástasis que aquellos que conservaron la antigenicidad. Los pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas presentaron un incremento del carácter no secretor (52,3 por ciento) respecto de la población control (19,5 por ciento) y de aquellos pacientes con lesiones orales benignas (15.4 por ciento). Se observó una importante asociación entre pacientes no secretores y deleción de los antigenos ABH en muestras de lesiones orales. Además, hemos encontrado, en el grupo no secretor, una mayor malignidad de las lesiones orales como así también una mayor presentación de displasia epitelial. El estudio del carácter secretor en los pacientes con lesiones orales...

Aloinmunizacion a un antigeno del sistema rh de alta frecuencia / Alloimmunization to a high frequency Rh antigen

Describimos el caso de una embarazada sensibilizada con un aloanticuerpo anti-Rh17 de muy amplia reactividad. Los glóbulos rojos de la paciente presentaban una deleción parcial de los antígenos del sistema Rh, responsable de la aloinmunización encontrada. Debido a la dificultad de obtener sangre compatible se elaboró un plan de transfusión autóloga para cubrir las posibles demandas. El análisis molecular del locus RH demostró la presencia de un alelo híbrido RHCE-D(5-7)-CE que generaba el fenotipo delecionado.

Determinación de IgG en eritrocitos senescentes por un ensayo enzimático con consumo de antiglobulina / Determination of senescent red blood cells bound IgG using an enzyme test based an the consuption of antiglobulin

Durante el envejecimiento de los GR se acumula IgG autóloga sobre la membrana eritrocitaria. Esta IgG esta dirigida a un neo antígeno de senescencia, ubicado en la proteína banda 3. El objetivo de este trabajo fue determinar pequeñas cantidades de IgG en la membrana del GR utilizando un inmunoensayo con antiglobulina conjugada con una enzima. Las suspensiones de GRSe y GRJ fueron incubadas con anti-IgG humana conjugada con fosfatasa alcalina. Se transfirieron alícuotas a microplacas sensibilizadas con IgG humana. Se agregó el sustrato de la enzima y se midió la IgG libre. Las concentraciones de IgG unida a la membrana eritrocitaria en GRSe (13.31 x 10-4(g/(L(1.57 x 10-4) fueron significativamente mayores (p(0.0001) que los valores observados en GR (3.35 x 10-4(g/(L(1.39 x 10-4). Los resultados obtenidos indican que esta metodología constituye una herramienta útil para determinar pequeñas contidades de IgG unida a la membrana eritrocitaria.

Enfermedad hemolítica fetoneonatal: estudio prenatal del genotipo RHD / Feto-neonatal hemolytic disease: prenatal study of RHD genotype

El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico por PCR. Se estudiaron 65 muestras de líquido amniótico, 11 de madres RhD negativas sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del ADN analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de ADN de líquido amniótico y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n = 62) se realizó la genotipificación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de tres productos de amplificación en los fenotipos RhD positivos y sólo un fragmento de ADN en los fenotipos RhD negativos. Se genotipificaron 54 fetos RhD positivos (8 de madres RhD negativas sensibilizadas) y 8 fetos RhD negativos (3 de madres RhD negativas sensibilizadas). La genotipificación del ADN fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD negativos.

Nuevas estrategias para el análisis genético y molecular del sistema Rh / New strategies for molecular and genetic analysis of Rh system

El locus RH está compuesto, en cada cromosoma de individuos RhD positivo, por dos genes estructurales, adyacentes y homólogos, denominados RHCE y RHD, que codifican las proteínas RhCcEe y RhD respectivamente, mientras que en individuos RhD negativo se encuentra únicamente el gen RHCE. La determinación de las bases moleculares asociadas con los antígenos y fenotipos de este sistema permite investigar el gran polimorfismo del locus RH. El objetivo de este trabajo es estudiar nuevas estrategias para el análisis genético y molecular del sistema Rh. Investigamos la organización genética general del locus RH en individuos pertenecientes a la población de Rosario con distintos fenotipos Rh. En muestras de ADN genómico de dadores voluntarios analizamos dos regiones diferentes del gen RHD mediante el diseño de una estrategia de PCR multiplex basado en el polimorfismo de longitud del intrón 4 y en la presencia de una secuencia específica en la región 3' no codificante del gen RHD. Los resultados obtenidos con esta estrategia molecular presentaron una estricta correlación con los hallados por métodos serológicos. Los estudios realizados en la población analizada en este trabajo indicaron que todos los individuos RhD positivo poseen los dos genes RH, mientras que las personas RhD negativo tendrían solamente el gen RHCE. Se estudiaron 15 muestras RhD positivo débil, observándose siempre el patrón de bandas característico de las muestras RhD positivo. Estos resultados permitieron descartar fenotipos RhD negativo en las muestras con aglutinación muy débil y la presencia, en estos individuos, de genes híbridos responsables del fenotipo D.

Erythrophagocytosis assay in patients with autoimmune hemolytic anemia

The aim of this paper is to evaluate the erythrophagocytosis assay (EA) in patients with autoimmune hemolytic anemia (AIHA). Direct antiglobulin test (DAT), indirect antiglobulin test (ITA) and EA were performed in blood samples from 46 patients with presumed AIHA. The EA was carried out incubating patients'erythocytes and peripheral blood monocyte. A total of 200 monocytes were analysed to determine the percentage of active phagocytic cells (porcentage APC). In 9 of these patients the applied treatment was evaluated by DAT,IAT and EA. In 14 transfusion requirements, the compatibility tets and EA were performed. For EA, patients'monocyte were incubated with erytrocytes from previously selected units sensitized with patients'sera. The porcentage of APC was 32.1 +/- 1.7 in 35 patients with positive DAT and 17.8 +/- 1.3 in 11 patients with negative DAT. This last value was significantly higher than that with negative controls (3.7 +/- 0.3) (p

Genotipificación del sistema RH en líquido amniótico / Rh system genotyping in amniotic fluid

El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico (LA) por PCR. Se estudiaron 65 muestras de LA, 11 de madres RhD-sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del AND analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de AND de LA y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n=62) se realizó la genotipicación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de 3 productos de amplificación en los fenotipos RhD+ y sólo un fragmento de AND en los fenotipos RhD-. Se genotipificaron 54 fetos RhD+ ( de 8 madres RhD- sensibilizadas) y 8 feto RhD- ( 3 de madres RhD- sensibilizadas). La genotipificación del AND fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal (EHFN) y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD-.

Aplicaciones clínicas de la prueba funcional de eritrofagocitosis / Functional test of erythrophagocytosis : clinical aplications

Debido a la multitud de factores humorales y celulares que intervienen en la destrucción eritrocitaria, es difícil correlacionar la alteración in vivo con las pruebas in vitro. Hemos desarrollado el ensayo de eritrofagocitosis para ser utilizado como parámetro evaluador de los fenómenos que ocurren in vivo. Esta pruba estudia la capacidad de adherencia y fagocitosis de los monocitos de sangre periférica para hematíes sensibilizados. Se ha demostrado su utilidad en el diagnóstico de AHAI por anticuerpos calientes, fundamentalmente en pacientes que presentan la prueba de la antiglobulina directa sistemáticamente negativa. También permitió realizar el seguimiento y respuesta al tratamiento de estos pacientes, que presentaron prueba de Coombs directa e indirecta positiva, independientemente del número de moléculas de IgG presente por GR. Los porcentajes de CFA obtenidos mediante la prueba de eritrofagocitosis fueron variando de acuerdo con el tratamiento aplicado, indicando una modificación en los niveles de IgG presente en los hematíes. Este ensayo funcional fue aplicado también en el estudio de aloanticuerpos. La EHFN resulta a menudo difícil de predecir por pruebas serológicas de rutina, debiendo recurrirse a métodos invasivos. Hemos aplicado la prueba de monocapa de monocitos, reflejando una mejor correlación con el estado clínico del bebé que las pruebas serológicas realizadas. En Medicina Transfusional es de importancia determinar el significado clínico de los anticuerpos que presentan reactividad contra antígenos de muy alta frecuencia. El ensayo de monocapa de monocitos fue realizado en pacientes con requerimiento transfusional que presentaron pruebas pretransfusionales positivas. Se transfundieron las unidades de sangre con menor porcentaje de CFA. Este ensayo celular presenta una mejor correlación de la hemólisis desarrollada in vivo, pudiendo ser aplicado cuando no se disponga de sangre compatible.